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细菌内毒素检测

william威廉亚洲官方能够为客户提供质料药及差别类型制剂的微生物及细菌内毒素等检测的要领学开发、验证和检测。

细菌内毒素是革兰氏阴性菌的细胞壁组分，当细菌殒命或自溶后便会释放出内毒素。其脂多糖（LPS）的两性大分子因素具有高致热性。当内毒素通过注射等方法进入人体血液时会引起差别的疾病，严重者可致休克甚至殒命（热原反应）。因此，制药企业从原辅料，包材，原液，半制品和制品等各个环节，都需要对细菌内毒素加以控制。

细菌内毒素检查法(BET)是使用鲎试剂来检测或量化细菌内毒素，以判断供试品中细菌内毒素的限量是否切合划定的一种要领。包括凝胶法（限度实验、半定量实验）、光度测定法（浊度法、显色基质法），可使用其中任何一种要领举行试验，当测定效果有争议时，除尚有划定外，以凝胶法效果为准。

william威廉亚洲官方关于内毒素检测已建设成熟的流程，并已完成上百个海内外新药和仿制药的内毒素检测、要领开发和验证，项目周期短，速率快，准确度高，受到客户的普遍一定。

细菌内毒素检查法（凝胶法）实验程序

1. 实验准备：试剂耗材及用具等
william威廉亚洲官方使用的相关内毒素检测试剂耗材及用具都是经由严酷的供应商筛选并采购，市面上公认的且切合要求的相关试剂和用具，如湛江安度斯品牌的内毒素标准品、鲎试剂和检查用水等。

2. 确定药品的细菌内毒素限值（L）
产品的细菌内毒素限值一样平常是通过公式L=K/M盘算获得的。其中M为人用每千克体重每小时最大供试品剂量，可参考药品说明书或具有权威性资料的用法用量。william威廉亚洲官方专业团队也可提供相关手艺指导并团结预筛选试验效果资助客户快速准确制订相关限度标准。

3. 盘算供试品的最大有用稀释倍数（MVD）或最低有用浓度（MVC）

4. 复核鲎试剂迅速度

5. 药品与鲎试剂相容性的初筛试验

6. 供试品滋扰试验以及滋扰试验的验证
凝胶法系使用细菌内毒素与鲎试剂反应可形成凝胶的原理，来测定供试品中的内毒素含量是否切合划定。反应历程中会受到许多因素的影响，经常保存滋扰问题。例如来自样品中的主因素、辅剂、甚至一些杂质等。大部分的滋扰作用都可以通过使用细菌内毒素检查用水稀释供试品的要领扫除。当有些滋扰作用仅使用稀释法不可扫除时，可接纳其他要领消除滋扰因素，然后再举行试验。
基于文献和实践履历案例等，william威廉亚洲官方整理出一套完善的种种滋扰因素和对应的扫除要领，能够实现快速精准扫除滋扰并举行验证试验。

滋扰因素和扫除要领汇总表

滋扰因素	扫除要领
pH值的滋扰	调理pH值至6.0~8.0
二价阳离子浓度缺乏造成的滋扰	添加适量Ca²⁺、Mg²⁺离子缓冲液
内毒素群集造成的滋扰	按期涡旋，配制前涡旋
高浓度盐或糖的滋扰	稀释或使用适当超滤装备
脂质体的滋扰	加内毒素疏散剂
内毒素吸附的滋扰	首选硼硅酸盐玻璃的稀释管、反应管、刻度吸管，一次性用具应选择聚苯乙烯
外貌活性剂的滋扰	试验专心理盐水稀释供试品，心理盐水可使供试品盐化，从而降低其外貌活性
酶、酶抑制剂带来的滋扰	将供试品适当加热使酶失活
葡聚糖的滋扰	使用抗增液复溶鲎试剂

7. 供试品一样平常的内毒素限量检查。

8. 可疑效果处置惩罚程序

实验职员首先对实验项目举行回首：磨练用标准、磨练操作、纪录和盘算、仪器状态、.标准物质、试剂质量、其他异常征象（是否有可能保存污染，情形、器械等）复核职员举行复核:若发明磨练职员磨练历程保存异常，复核职员以准确的磨练历程重复实验一次，以取代最初的实验效果。若未发明磨练职员磨练历程保存异常，为了确定缺乏格效果是否由测试或剖析误差缘故原由造成，复核职员可重复实验。定量试验提供数据参考差别鲎试剂的使用

案例

配景：脂质体辅料工艺研发和生产项目，由于限度，客户关于内毒素检测的要领始终没有开发乐成，如上所说，内毒素检测中因工艺引入或产品自己保存的一些滋扰因素，在稀释到产品最大有用稀释倍数的情形下仍然不可扫除滋扰，抑制内毒素和鲎试剂的反应导致供试品阳性比照组检测为阴性。
william威廉亚洲官方微生物团队通过一整套相关滋扰因素的扫除，基于工艺办法团结以往履历在短时间内开发出能够扫除众多滋扰因素的产品前处置惩罚要领。
1. 脂质体水溶性差
脂多糖的两亲性会使其对一些具有疏水基团的产品具有亲和力，脂多糖与这些产品的团结会使其巨细和形状受到影响，以至于影响活性，使内毒素试验受到滋扰，形成抑制。通过加入适量内毒素疏散剂使产品中的内毒素疏散出来，可恢复内毒素的活性。
2. 螯合剂滋扰
工艺中引入的试剂含有螯合剂因素会螯合鲎试剂中的二价阳离子（如Mg²⁺离子）从而造成而家阳离子缺乏造成抑制。同时加入适量Mg²⁺离子缓冲液，扫除工艺引入的相关螯合剂导致二价阳离子缺乏的滋扰，从而使内毒素正常激活鲎试剂的酶反应。
综上扫除多种因素滋扰，在允许的最大稀释倍数浓度下顺遂通过滋扰实验的验证并完成限量检查。资助客户在短周期内实现快速交付。
注：
参考安度斯相关资料
中国药典2020版四部通则1143 细菌内毒素检查法及
中国药典2020版四部通则9251 细菌内毒素检查法应用指导原则