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纳米抗体服务简介M13 噬菌体展示手艺噬菌体文库的构建与纳米抗体的淘选骆驼与羊驼VHH抗体文库比照| 较量项目 | 骆驼VHH抗体文库 | 羊驼VHH抗体文库 |
|---|---|---|
| 抗原耐受量 | 高，可多种抗原混淆高剂量免疫 | 较高，多种抗原混淆中等免疫剂量 |
| HCAb血清中球卵白比列 | 60%~80% | 20%~30% |
| 中和抗体效价 | 高 | 较高 |
| 采血量 | 一次可采血200ml | 一次80-100ml血液 |
| 有用库容 | 高，免疫库108-109 | 高，免疫库107-108 |
| 动物本钱 | 较低 | 高 |
| 抗原需求量 | 4-6mg，纯度>85% | 4-5mg，纯度>85% |
纳米抗体制备服务流程示意图
Image source: MA Lin-lin, et al. Construction and screening of phage display library for TIM-3 nanobody. Acta Pharmaceutica Sinica2018, 53 (3): 388-395.
驼科纳米抗体文库制备项目流程| 办法 | 内容 | 周期 | 交付 |
|---|---|---|---|
| 第一步：抗原准备 | 客户提供抗原或者william威廉亚洲官方准备抗原 | 3-4周 | 若是客户提供抗原，质量标准：1. >5mg；2. SDS-PAGE >95% |
| 第二步：动物免疫 | 免疫未免疫的空缺骆驼 5 ml 未免疫血清 ELISA磨练血清效价 | 10-12周 | 若是由于抗原毒性导致的动物殒命,需要收取一定用度 凭证 ELISA效果，客户决议怎样建库 |
| 第三步：抗体cDNA制备 | 外周血疏散PBMC 提取总RNA并反转录为cDNA | 3-4周 | 提供存放在Trizol 中的PBMC 提供高保真RT-PCR制备的cDNA |
| 第四步：噬菌体文库构建 | 构建噬菌粒 噬菌体文库构建 | VHH片断插入率≥75% 有用库容量≥108CFU/mL | |
| 第五步：噬菌体文库淘选 | 噬菌体展示纳米抗体，淘选，至少淘选两轮 阳性克隆的ELISA验证、判断、筛选和测序（200个克隆测序） 阳性克隆测序及测序效果剖析 | 4-6周 | 包管至少 20 个序列 |
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